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稿件信息
稿件标题: PKD1对HeLa 细胞中AP1的转录激活作用
稿件作者: 邹志鹏,许万福,冯 丽,等
关键字词: 蛋白激酶D1;AP1;siRNA;转录激活
文章摘要: 摘要:目的研究蛋白激酶D1(PKD1)对人HeLa细胞中AP1转录激活作用,为探讨PKD1作用的AP1靶基因的功能作用奠定基础。方法首先将对照质粒pcDNA3.1、PKD1野生型质粒(pcDNAPKD1)或无激酶活性突变型质粒pcDNAPKD1DN与AP1转录活性报告质粒pAP1luc及内参照报告质粒pRLSV40共转染人HeLa细胞,同时将对照siRNA(siCTL)或PKD1 siRNA(siRNAPKD1)与AP1转录活性报告质粒pAP1luc及内参照报告质粒pRLSV40也共转染人HeLa细胞。转染48 h后,分别收集细胞裂解液进行Western blot 检测外源性PKD1过表达或内源性PKD1敲低状况,并以Promega双报告基因分析试剂盒测定AP1荧光素酶活性,计算AP1相对转录活性。结果Western blot证实HeLa细胞中外源性pcDNAPKD1、pcDNAPKD1DN过表达,而且siRNAPKD1明显敲低HeLa细胞中内源性PKD1表达;双色荧光素酶报告基因检测表明,与对照质粒pcDNA3.1比较,pcDNAPKD1过表达明显增强AP1转录活性(P<0.05),相反,与pcDNAPKD1比较,pcDNAPKD1DN过表达则明显降低AP1转录活性(P<0.05)。与之相符,与siCTL比较,siRNAPKD1对内源性PKD1敲低,也明显抑制AP1转录活性(P<0.01)。结论PKD1表达和激酶活性增强HeLa细胞中AP1转录激活,提示PKD1 可能通过AP1调控相关靶基因表达。
文章基金: 国家自然科学基金资助项目;教育部留学回国人员科研启动基金资助项目;南方医科大学院长基金资助项目
杂志名称: 重庆医学
文章刊期: 2010年39卷15期
文章栏目: 论著
相关信息: 文件大小:512 字节
页码:1945
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