| 稿件标题： | 人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型的建立 |
| 稿件作者： | 彭韦霞1，文 芳2，曹仁贤3，杨慧龄3，颜 斌2，张友其1 |
| 关键字词： | 【关键词】Caveolin-1；人脐静脉内皮细胞；siRNA；慢病毒表达系统 |
| 文章摘要： | 【摘要】目的：利用小干扰RNA（siRNA）技术建立人脐静脉内皮细胞（ECV304）小凹蛋白(Caveolin-1)基因沉默模型，为研究Caveolin-1基因在人脐静脉内皮细胞中的作用。方法：通过Ambion专用软件对Caveolin-1基因编码区分析，设计合成短发夹RNA(shRNA)单链。通过T4连接酶将退火反应合成的shRNA双链克隆入含RNA PolIII聚合酶表达元件的pENTRTM/U6入门载体，并利用Gateway技术构建相应的慢病毒RNA干扰（RNAi）表达载体。用REAL-TIME RT-PCR、蛋白印迹法分析沉默效率。结果：测序结果显示pENTRTM/U6载体插入的Cavelin－1基因shRNA序列大小及阅读框架正确。LR重组反应后成功构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统。转染ECV- 304细胞获得对Caveolin-1的沉默效率大于85％。结论：成功地构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统，获得了长期稳定的基因剔除效应。人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型能长期保种及传代，为进一步研究Cav-eolin-1基因的功能奠定了基础。 |
| 杂志名称： | 现代医药卫生 |
| 文章刊期： | 2011年27卷13期 |
| 文章栏目： | 实验研究 |
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