| 稿件标题： | NLRP3对FFA诱导Kupffer细胞释放促炎性因子IL-1β的影响 |
| 稿件作者： | 罗生才，何堃，龚建平 |
| 关键字词： | 库普弗细胞；游离脂肪酸；NLRP3炎性小体；促炎性因子 |
| 文章摘要： | ［摘要］目的 观察敲除小鼠Nod样受体蛋白3（NLRP3）基因对游离脂肪酸（FFA）激活Kupffer细胞（KCs）中NLRP3炎性小体及促炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）分泌的影响，探讨FFA导致促炎性因子IL-1β分泌的机制。 方法 选取野生型C57BL/6小鼠及NLRP3-/-小鼠，采用梯度离心联合选择性贴壁法分离各组小鼠KCs，将分离培养48 h的KCs以3×106的密度接种于激光共聚焦培养皿及培养瓶中，并将KCs随机分为2组（对照组和FFA组）。对照组不给予任何刺激，FFA组给予棕榈酸（PA）刺激细胞，水平为0.32 mM，处理时间为8 h。采用光镜及透射电镜分别观察KCs的形态变化，逆转录实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）技术检测NLRP3炎性小体、凋亡相关颗粒样蛋白（ASC）及天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）的mRNA表达变化，采用蛋白质免疫印迹（Western blotting）技术检测NLRP3炎性小体、ASC及Caspase-1的蛋白表达水平，采用免疫荧光技术检测NLRP3及Caspase-1在KCs中的表达情况，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定KCs培养上清液中促炎性因子IL-1β与IL-18的表达水平。 结果 光镜下见FFA组与对照组KCs形态上无显著差异，透射电镜下可见FFA刺激后KCs细胞质中吞噬了大量脂滴。野生型小鼠KCs中FFA组NLRP3、ASC及Caspase-1的mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）；而NLRP3-/-小鼠KCs中对照组NLRP3、ASC及Caspase-1的mRNA及蛋白表达量与FFA组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。野生型小鼠FFA组KCs培养上清液中促炎性因子IL-1β与IL-18的表达水平较对照组显著增高，差异均有统计学意义（P<0.05）；而敲除小鼠NLRP3基因可显著抑制IL-1β与IL-18水平的增高，2组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 FFA可激活野生型小鼠KCs中NLRP3炎性小体，促进KCs分泌促炎性因子IL-1β；敲除小鼠NLRP3基因后可显著抑制FFA诱导KCs中NLRP3炎性小体的激活及促炎性因子IL-1β的分泌；NLRP3可作为KCs相关炎性疾病治疗的潜在靶点。 |
| 文章基金： | 国家自然科学基金项目（31370753） |
| 杂志名称： | 现代医药卫生 |
| 文章刊期： | 2019年35卷1期 |
| 文章栏目： | 论著 |
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