| 稿件标题： | 采用CRISPR/Cas9系统构建HIF-1α基因敲除质粒及功能验证 |
| 稿件作者： | 陈年杰，洪裕程，沈悦，王进涛，钟良军 |
| 关键字词： | ［关键词］CRISPR/Cas9；缺氧诱导因子-1α；载体构建；基因编辑；功能验证 |
| 文章摘要： | ［摘要］目的采用簇状规则间隔短回文重复序列(CRISPR)/Cas9基因编辑技术构建质粒并敲除HEK-293细胞的HIF-1α基因。方法通过在线软件设计3号外显子上靶向HIF-1α的sgRNA，并将其构建到CRISPR/Cas9载体中。经Sanger测序验证质粒构建正确后，将重组质粒通过Lipofectamine 3000转染到HEK-293细胞中。通过药物筛选提取细胞DNA和蛋白，用T7E1酶和Western blotting检测基因变化和蛋白表达情况。结果Sanger测序结果显示，所设计的sgRNA成功插入到CRISPR/Cas9载体中，序列验证正确，重组质粒构建成功。T7E1酶切实验成功切除3条带，sgRNA的打靶效率为33.8%。Western blotting结果显示，经过氯化钴诱导、转染药筛后的HEK-293细胞蛋白表达水平较野生型细胞明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论成功构建靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9载体，载体靶向敲除HIF-1α基因功能验证成功。 |
| 文章基金： | 浙江省杭州市卫生科技计划重大项目（Z2020046）；浙江省杭州市医药卫生科技重点项目(ZD20210016) |
| 杂志名称： | 现代医药卫生 |
| 文章刊期： | 2022年38卷11期 |
| 文章栏目： | 论著 |
| 相关信息： |
文件大小：2.69 MB 页码：1838 浏览次数：1696 下载次数：21 |
| 免费查看全文 下载PDF阅读器 下载本期目录 下载本期封面 | |